Հինգ ուժ.
● Նուկլեինաթթվի արդյունահանման և մաքրման քայլով կազմաձևված գործիք
● Գործիքը կազմաձևված է ուլտրաձայնային արդյունահանման մոդուլով
● Գործիքը կազմաձևված է լրիվ ավտոմատով
● Գործիքը կազմաձևված է փոփոխական ջերմաստիճանի ուժեղացումով
● Գործիքը կազմաձևված է ամբողջությամբ փակ ռեագենտների հավաքածուով
1. Արդյո՞ք նուկլեինաթթվի հայտնաբերման ռեակտիվները պետք է արդյունահանվեն և զտվեն:
Նուկլեինաթթվի հայտնաբերման սկզբունքը հետևյալն է. պրայմերի ազդեցության տակ ԴՆԹ պոլիմերազը օգտագործվում է ԴՆԹ/ՌՆԹ ձևանմուշի վրա շղթայական ռեակցիայի ուժեղացում կատարելու համար (պահանջում է NA-ի հակադարձ տառադարձում), այնուհետև հայտնաբերվում է թողարկված լյումինեսցենտային ազդանշանի քանակը՝ որոշելու համար։ արդյոք նմուշը պարունակում է հայտնաբերման ենթակա հարուցիչի նուկլեինաթթու (ԴՆԹ/ՌՆԹ):
1) Չարդյունահանված կամ չմաքրված նմուշները կարող են պարունակել բազմաթիվ բաղադրիչներ, որոնք ազդում են վերջնական արդյունքի վրա. աղ (որը հանգեցնում է սինթազայի ապաակտիվացման և առաջացնում է կեղծ դրական), չափազանց թթվային կամ չափազանց ալկալային PH (որը կարող է հանգեցնել ռեակցիայի ձախողմանը), Անավարտ ՌՆԹ (հանգեցնում է կեղծ բացասական հակադարձ տրանսկրիպցիայի ձախողման):
2) Որոշ նմուշներ դժվար է ուղղակիորեն ուժեղացնել. գրամ-դրական և որոշ մակաբույծներ, իրենց հաստ բջիջների պատերի և այլ կառուցվածքների պատճառով, եթե դրանք չանցնեն նուկլեինաթթվի արդյունահանման և մաքրման գործընթաց, ապա արդյունահանումից զերծ փաթեթը կարող է ձախողվել նման դեպքերում: նմուշներ.
Հետևաբար, խորհուրդ է տրվում ընտրել նուկլեինաթթվի արդյունահանման քայլով կազմաձևված թեստային փաթեթը կամ գործիքը:
2. Քիմիական արդյունահանո՞ւմ, թե՞ ֆիզիկական ուլտրաձայնային բեկորային արդյունահանում:
Ընդհանուր առմամբ, քիմիական արդյունահանումը կարող է կիրառվել նախնական մշակման և մաքրման մեծ մասի համար:Այնուամենայնիվ, հաստ պատերով գրամ դրական բակտերիաների և որոշ մակաբույծների դեպքում նաև այն դեպքն է, երբ քիմիական արդյունահանումը չի կարող ստանալ արդյունավետ նուկլեինաթթվի ձևանմուշներ, ինչը հանգեցնում է կեղծ բացասական հայտնաբերման:Բացի այդ, քիմիական արդյունահանումը հաճախ օգտագործում է ուժեղ նյութեր, եթե լուծարումը մանրակրկիտ չէ, ապա հեշտ է ուժեղ ալկալիներ ներմուծել ռեակցիայի համակարգ, ինչը հանգեցնում է ոչ ճշգրիտ արդյունքների:
Ուլտրաձայնային մասնատումը օգտագործում է ֆիզիկական ջախջախում, որը հաջողությամբ օգտագործվել է GeneXpert-ի կողմից, որը POCT-ի ոլորտում մարդկային օգտագործման առաջատար ձեռնարկությունն է, և բացարձակ առավելություն ունի որոշ բարդ նմուշների նուկլեինաթթվով արդյունահանման գործում (օրինակ՝ Mycobacterium tuberculosis):
Հետևաբար, խորհուրդ է տրվում ընտրել նուկլեինաթթվի արդյունահանման քայլով կազմաձևված թեստային հավաքածու կամ գործիք:և դա օպտիմալ է, եթե կա ուլտրաձայնային արդյունահանման մոդուլ:
3. Ձեռնարկ, կիսաավտոմատ և լիովին ավտոմատ:
Սա աշխատանքի արժեքի և աշխատանքի արդյունավետության խնդիր է:Ներկայումս կենդանիների հիվանդանոցները, որոնք չունեն բավարար անձնակազմ, և նուկլեինաթթվի արդյունահանումն ու հայտնաբերումը որոշակի հմտություններ և փորձ պահանջող աշխատանք է:Կասկած չկա, որ լիովին ավտոմատ նուկլեինաթթվի արդյունահանման և հայտնաբերման մեքենան կատարյալ ընտրություն է:
4. Ջերմաստիճանի մշտական ուժեղացում, թե՞ փոփոխական ջերմաստիճանի ուժեղացում:
Ուժեղացման ռեակցիան նուկլեինաթթվի հայտնաբերման օղակ է, և այս կապում ներգրավված մասնագիտական տեխնոլոգիան բարդ է:Կոպիտ ասած, ֆերմենտներն օգտագործվում են նուկլեինաթթվի ուժեղացման համար։Ուժեղացման գործընթացում հայտնաբերվում է ուժեղացված ֆլյուորեսցենտային ազդանշանը կամ ներկառուցված ֆլյուորեսցենտային ազդանշանը:Ընդհանուր առմամբ, որքան շուտ է հայտնվում ֆլյուորեսցենտային ազդանշանը, այնքան մեծ է նմուշի թիրախային գենի պարունակությունը:
Մշտական ջերմաստիճանի ուժեղացումը նուկլեինաթթվի ուժեղացում է ֆիքսված ջերմաստիճանում, մինչդեռ փոփոխական ջերմաստիճանի ուժեղացումը ցիկլային ուժեղացում է, որը խստորեն համաձայն դենատուրացիա-կռում-ընդլայնում է:Անցկացվել է մշտական ջերմաստիճանի ուժեղացման ժամանակը, մինչդեռ փոփոխական ջերմաստիճանի ուժեղացման ժամանակը մեծապես ազդում է սարքի ջերմաստիճանի բարձրացման և անկման արագությունից (ներկայումս շատ արտադրողներ կարողացել են կատարել ուժեղացման 40 ցիկլ մոտ 30 րոպեում):
Եթե լաբորատոր պայմանները լավ են, իսկ գոտիավորումը խիստ է, ապա ողջամիտ է ասել, որ երկուսի միջև ճշգրտության տարբերությունը մեծ չի լինի:Այնուամենայնիվ, փոփոխական ջերմաստիճանի ուժեղացումը համեմատաբար ավելի կարճ ժամանակում կսինթեզի ավելի շատ նուկլեինաթթու արտադրանք:Լաբորատորիաների համար, առանց խիստ գոտիավորման և մասնագիտական պատրաստվածության անձնակազմի, նուկլեինաթթվի աերոզոլի արտահոսքի վտանգը ավելի մեծ կլինի, կեղծ դրականը տեղի է ունենում արտահոսքի ժամանակ, և որը չափազանց դժվար է վերացնել:
Բացի այդ, մշտական ջերմաստիճանի ուժեղացումը նույնպես ավելի հակված է ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման, երբ նմուշը բարդ է (հարաբերական ռեակցիայի ջերմաստիճանն ավելի ցածր է, և որքան բարձր է երկարացման ջերմաստիճանը, այնքան ավելի լավ է այբբենարանի կապման առանձնահատկությունը):
Ինչ վերաբերում է ներկայիս տեխնոլոգիային, ապա փոփոխական ջերմաստիճանի ուժեղացումը ավելի հուսալի է:
5. Ինչպե՞ս խուսափել նուկլեինաթթվի ուժեղացման արտադրանքի արտահոսքի վտանգից:
Ներկայումս շատ արտադրողներ ընտրում են գեղձի տիպի PCR խողովակ՝ որպես նուկլեինաթթվի ռեակցիայի խողովակ, որը կնքվում է շփման միջոցով, և փոփոխական ջերմաստիճանի դենատուրացիայի դեպքում ջերմաստիճանի դենատուրացիան փոփոխական ջերմաստիճանի PCR ուժեղացման դեպքում հասնում է 90 աստիճանի։
Ցենտիգրադ.Ջերմությամբ ընդլայնման և ցրտի հետ կծկման կրկնվող գործընթացը մեծ մարտահրավեր է PCR խողովակի կնքման համար, և գեղձի տիպի PCR խողովակը համեմատաբար հեշտ է արտահոսք առաջացնել:
Գերադասելի է ռեակցիան ընդունել ամբողջովին կնքված հանդերձանքով/խողովակով, որպեսզի խուսափեք ռեակցիայի արտադրանքի արտահոսքից:Կատարյալ կլիներ, եթե հնարավոր լիներ մշակել նուկլեինաթթվի արդյունահանման և հայտնաբերման լիովին կնքված հավաքածու:
Այսպիսով, New Tech-ի նոր լիովին ավտոմատ նուկլեինաթթվի արդյունահանման և հայտնաբերման մեքենան ունի վերը նշված հինգ օպտիմալ տարբերակները:
Հրապարակման ժամանակը՝ օգ-09-2023
